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不能作為pcr模板的是(普通pcr步驟)

PCR實(shí)驗包括三大主要的熱循環(huán)步驟 整個(gè)過(guò)程包括:變性、退火、延伸。在這個(gè)過(guò)程中需要多種必要的反應成分 ,通過(guò)對PCR的設置做相應的調整,便可以獲得一些特殊的實(shí)驗結果,如產(chǎn)率提高,特異性增強或反應時(shí)間縮短等

熱啟動(dòng)PCR:常用于增強PCR擴增的特異性。通過(guò)借助一酶的修飾物來(lái)抑制某一種基本成分延遲DNA合成,直到PCR儀達到變性溫度。這種修飾可避免產(chǎn)生非特異性擴增。由于DNA聚合酶在室溫下的活性被抑制,熱啟動(dòng)技術(shù)為在室溫下配制多個(gè)PCR反應體系提供了極大的便利,且無(wú)需犧牲PCR反應的特異性。

降落PCR:另一種提升PCR反應特異性的方法是調整PCR循環(huán)的參數。在降落PCR中,前幾個(gè)循環(huán)的退火溫度設定為比引物的最高退火溫度(Tm)再高幾度,較高的溫度有助于避免產(chǎn)生引物二聚體及非特異性引物-模板復合物的形成,因此可減少不希望出現的非目的擴增。在PCR起始階段用較高的退火溫度可減少非特異性PCR產(chǎn)物,促進(jìn)特異性的擴增。

巢式PCR:巢式PCR是標準PCR的一種演變,其增強了反應特異性和目標擴增子的產(chǎn)量。在此方法中,需要設計兩對PCR引物,一對外引物,一對巢式引物。需進(jìn)行進(jìn)行2輪PCR擴增,第一輪PCR的產(chǎn)物作為第二輪PCR的模板。

快速PCR:通過(guò)縮減PCR反應步驟所需的時(shí)間來(lái)完成更快的擴增,此條件特別適用于有高擴增能力的DNA聚合酶,這類(lèi)聚合酶在每個(gè)結合中可引入更多的核苷酸。

Taq DNA聚合酶系列產(chǎn)品經(jīng)過(guò)多步純化精制而得。使用本產(chǎn)品擴增得到的PCR產(chǎn)物3′端帶A堿基,可克隆至T載體。操作簡(jiǎn)單,擴增效果穩定,可實(shí)現1kb/30s延伸速度。

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